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IMMUNOCYTOCHEMISTRY (ICC) 이번에 마우스 실험을 하게되면서 조직을 염색해야해서, 가지고 있는 Antibody가 제대로 작동하는지 아닌지 확인학자 immunocytochemistry를 하게 되었습니다. 저는 초보니 실험실 친구들의 도움을 받아서 했습니다. 마지막에 세포에서 핵도 염색되고 target protein을 빨강색으로 보니 논문 준비 중인데 이런 그림도 하나 넣어보고 싶은 생각이 들었습니다. 하지만 괜히 또 시작했다가 언제 끝날지 모르는 궁렁텅이로 빠질까봐 한번 해보겠다는 말은 못하겠습니다. 어째든 처음으로 immunocytochemistry (ICC)를 처음 하시는 분들도 따라할 수 있도록 쉽게 설명해보도록 해보겠습니다. 한글로 제가 한 방법을 적었고 아래는 원래 abcam에서..

Author: Roberto Salvi Source: Contributed by Roberto Salvi Date Added: Tue May 14 2002 Date Modified: Thu Apr 29 2004 Abstract: Glycogen can conveniently substitute for tRNA as a carrier for nucleic acid precipitation. Although Molecular Biology grade glycogen can be purchased from a number of vendors, the main disadvantage is that it is very expensive (e.g., About 100 dollars/20-40 mg). Here we..

Calcium chloraid를 이용한 Transfection to 293T cells *293T cell이 overgrowth하여 배지가 산성으로 되지 않도록 해야 함. SEEDING 1) 100mm dish 기준으로 2x10^6 로 seeding (transfection 하고 이틀 후 harvest 예정, cell 수는 알아서 정해야 함) (35mm dish, 3x10^5), DMEM은 10ml로 키움. *Incubationb until 60% confluency TRANSFECTION 1) Transfection 하기 한 시간전에 5ml DMEM을 추가하여 total 15ml(35mm dish, 총 4ml되도록) 로 만들어 놓음. 2) 미리 2X HBS를 얼음에 넣어둠. 3) 2ml e-tube 두..

Cancer의 가장 두려운 점은 바로 전이(metastasis)입니다. 전이과정이 일어나기 위해서는 암세포가 혈관벽을 뚫고 혈액으로 넘어가야하는데요. 이 과정을 Invasion이라고 합니다. Invasion assay는 이 과정을 평가하는 방법으로 matrigel을 얼마나 파고 들어가 이동하는지 테스트 하는 실험입니다. 암세포를 연구하는데 기본적으로 실행되는 실험이기도 합니다. 1. matrigel coating -24well plate, pippet tip, 1.5ml 튜브, plate insert를 얼음에 박아둔다. -matrigel은 하루전에 4도씨에서 녹인다. -4도씨 RPMI를 준비한다. -5mg/ml의 matrigel을 1mg/ml로 RPMI로 dilution (volumet 70ul) 한다...

Western blot에서 사용하는 lysis buffer를 만들때 필요한 TNN buffer recipe 입니다. 자주 사용하는 버퍼이기 때문에 tris나 NaCl, EDTA는 수용액으로 만들어 놓고 필요할때마나 넣으면 편합니다. TNN buffer (lysis buffer) 50mM Tris-Cl(pH7.4) 150mM NaCl. 0.5% NP40. 1mM EDTA. 이것은 기본 농도 입니다. 1.준비단계 Tris (mw:121.14) 6.057g + DW 50ml => 1M 용액 만듦. NaCl (mw:58.44) 14.610g + DW 50ml => 5M 용액 만듦. EDTA (mw:292.24) 1.169g + DW 20ml => 0.2M 용액 만듦. 0.5% NP40은 그냥 준비. 2.TNN ..

이번에 실험을 하면서 중요하면서도 너무 루틴하게 실험을 하다가 중요성을 잊고 있던 FBS에 관하여 이야기 해보고자 합니다. 왜 이것을 블로그에 쓰기로 했냐하면 2달간 제 실험을 엉망으로 만든 녀석이 바로 FBS거든요. FBS(Fetal bovine serum)는 세포가 먹는 밥이라고 생각하시면 됩니다. 생명공학을 전공하는 사람으로써 세포를 키우는 건 늘상 있는 일이고, 세포를 이용한 실험을 주로 합니다. 제스케줄은 세포가 어떤게 자라느냐에 따라 달라지죠. 조그마한 녀석들이 "일요일날 와서 날 좀 캐어해줘"하면 가야합니다. 어째든 세포의 건강 상태는 늘 중요하지만 루틴한 일이기 때문에 좀 관리가 소홀해지기도 하죠. 생물학을 하시는 분들은 아시겠지만 요즘 FBS의 가격이 엄청나게 올랐습니다. 30~40만원 ..

Nickel pull-down assay protocol 1.준비물 Urea buffer Soluble in water (1L) 8M Urea ->(MW:60.08, 480.64g) 0.3M NaCl ->(MW:58.44, 17.53g) 0.05M Na2HPO4 ->(MW:141.96, 7.098g) 0.05M Tris ->(MW:121.14, 6.057g) 0.001M PMSF ->(MW:174.2, 0.1743g) 0.01M Imidazole ->(MW:68.08, 0.680g) pH 8 Urea wash buffer Soluble in water (urea buffer에서 200ml 가져와서 imidazole을 0.02M로 맞춤, 1M imidazole 용액이있음.) 8M Urea0.3M NaCl0..

화학 원소는 우리가 사는 모든 것을 구성하는 기본 단위이다. 원소를 이해하는 것은 세상을 이해하는 한 가지 방법이라고 생각한다. 우리가 손에 들고 다니는 핸드폰부터 저 멀리 태양을 이해하는데도 이런 원소를 이해한다면 좀 더 다른 시선으로 세상을 바라 볼 수 있다. 또한 건강도 마찬가지다. 우리 몸에서 일어나는 질병과 치료는 모두 이런 원소의 특징이나 성질을 이용한 것이라고 할 수 있다. 간략한 내용을 적지만 흥미 삼아 글을 읽어보는 것도 좋겠다. 예전 연금술사들은 다양한 방법으로 금을 만들기 위해서 다양한 실험을 진행했다. 결과적으로 모두 실패했지만 그들의 연구를 토대로 오늘날 화학이 발전했다고 해도 과언은 아니다. 그 당시는 몰랐겠지만 금은 분자가 아닌 하나의 원소다. 요리처럼 여러 물질을 조합하고, ..

18세기 제 1차 산업혁명이 발생하면서 인간의 노동력으로 이뤄지던 일들이 기계의 힘으로 대체되는 놀라운 변화가 일어났다. 그리고 19세기 말부터 20세기 초까지 이어진 제 2차 산업혁명은 전기의 등장과 대규모 생산라인이 갖추면서 대량으로 물건을 생산을 할 수 있었다. 그리고 1960년대에 제 3차 산업혁명은 반도체와 컴퓨터 그리고 인터넷의 발달로 시작되었으며 '디지털 혁명'이라고 불린다. 지금은 제 4차 산업혁명은 21세기 시작과 동시에 시작되었다. 그전 산업혁명에 비해 체감하는 놀라움은 그리 크지는 않다. 4차 혁명은 이전에 3차 혁명의 주역인 컴퓨터와 네트워크를 기반으로 하기 때문이다. 그러나 이전보다 더 정교하다. 종합적이다. 광범위하다. 이것이 특징이다. 제 4차 산업혁명은 다른 산업혁명과 같이 ..

오늘도 '비만은 내 식탐 때문이 아냐!' 주장을 하며, 남탓을 하고자 이렇게 포스팅을 합니다. 항생제가 과도하게 사용되는 현대사회와 비만증 확산에 놀라운 상관 관계를 이 시간 말해볼 것입니다. 항생제와 비만이라... 얼핏보면 연관성을 찾기가 쉽지 않지만 여러가지 과학적 연구들을 통해 이미 밝혀진 사실이지요. 오늘은 항생제와 비만에 관한 이야기를 해보겠습니다. 2005년 임페리얼 칼리지 런던의 생화학과 교수인 제러미 니콜슨은 놀라운 가설을 세웠습니다. 여기서 놀라운 사실을 말씀 드리겠습니다. 1940년대 후반에 우연히 미국 과학자들은 닭에게 항생제를 주입하면 성장률이 50%나 높아진다는 사실을 발견했습니다. 그 당시는 종전후라 고기를 먹기가 어려운 시대였습니다. 그래서 사람들은 값싼 육류든 뭐든 고기를 먹..